Елена Олеговна Шамшурина – кандидат медицинских наук
Екатеринбург
Elena O. Shamshurina – Ph.D. in medicine
Ekaterinburg
Анна Сергеевна Могиленских – аспирант
Екатеринбург
Anna S. Mogilenskikh – Postgraduate Student
Ekaterinburg
Екатерина Владимировна Гребенюк – аспирант
Екатеринбург
Ekaterina V. Grebenyuk – Postgraduate Student
Ekaterinburg
Виктория Сергеевна Самохина – студент
Екатеринбург
Victoria S. Samokhina – Student
Ekaterinburg
Сергей Владимирович Сазонов – доктор медицинских наук, профессор
Екатеринбург
Sergei V. Sazonov – Doctor of Science (Medicine), Professor
Ekaterinburg
Сергей Михайлович Демидов – доктор медицинских наук, профессор
Екатеринбург
Sergei M. Demidov – Doctor of Science (Medicine), Professor
Ekaterinburg
Введение. Первичные клеточные культуры карциномы молочной железы (КМЖ) используются как модель для изучения процессов внутриопухолевой гетерогенности, лекарственной резистентности и различных молекулярно-биологических процессов. Одним из вариантов первичной культуры является неадгезивная культура клеток в виде сфероидов – маммосфер. Имеются данные о том, что клетки, выделенные из маммосфер, имеют мезенхимальные признаки. Однако приобретение мезенхимальных признаков в маммосферах, полученных из опухолей , коррелирует с подавлением экспрессии рецепторов эстрогена и, следовательно, с резистентностью к терапии против гормонзависимых опухолей .
Цель исследования – определить влияние методики культивирования клеток КМЖ на способность клеток сохранять эпителиальный фенотип.
Материалы и методы. Представлен сравнительныи анализ двух образцов культуры КМЖ, исследуемых на протяжении трех пассажеи при разных способах культивирования. Окраска для морфологическои оценки проводилась по Паппенгеи му. Определение принадлежности клеток к эпителиальным проводили с использованием антитела anti-Pan Keratin (AE1/AE3/PCK26) Primary Antibody (Roche diagnostics, USA).
Результаты. Для анализа культур были взяты три пассажа (Р2, Р3, Р4) неадгезивных и три пассажа адгезивных клеток. В ходе исследования данных вариантов культуры КМЖ были определены морфологические особенности клеток на каждом пассаже и обнаружено, что независимо от методики, выбраннои при культивировании, клетки исследуемых культур сохраняют эпителиальныи фенотип. Однако при исследовании адгезивнои культуры выявлен большии процент клеток, демонстрирующих эпителиальныи фенотип, по сравнению с клетками неадгезивнои культуры.
Обсуждение. В ходе исследования выделено шесть морфологических групп клеток, полученных при создании первичной культуры образца КМЖ, среди которых проявляются отличия в сохранении эпителиальной природы на всем протяжении культивирования.
Заключение. Выбор методики культивирования оказывает влияние на способность клеток сохранять эпителиальный фенотип на протяжении трех пассажей . На втором пассаже уровень экспрессии панцитокератина в адгезивнои культуре значимо отличается от неадгезивнои . К четвертому пассажу происходит резкое снижение количества эпителиальных клеток.
Introduction. Primary cell cultures of breast carcinoma (BC) are used as a model for study the processes of intratumoral heterogeneity, drug resistance and various molecular and biological processes. One of the variants of primary culture is non-adhesive cell culture in the form of spheroids – mammospheres. There is evidence that cells isolated from mammospheres have mesenchymal features. However, the acquisition of mesenchymal features in mammospheres derived from tumors correlates with suppression of estrogen receptor expression and, therefore, with resistance to therapy against hormone-dependent tumors.
The aim of the study was to determine the effect of the method of culturing BC cells on the ability of cells to preserve the epithelial phenotype.
Materials and methods A comparative analysis of two BC culture samples examined over three passages using different methods of cultivation was performed. Staining for morphological evaluation was carried out according to Pappenheim. Determination of belonging to epitheliocytes was performed using anti-Pan Keratin (AE1/AE3/ PCK26) Primary Antibody (Roche diagnostics, USA).
Results Three passages (P2, P3, P4) of non-adherent and three passages of adherent cells were taken for culture analysis. During the study of these BC culture variants, the morphological features of the cells in each passage were determined and it was found that regardless of the technique chosen during cultivation, the cells of the cultures under study retained the epithelial phenotype. However, the study of the adhesive culture revealed a higher percentage of cells showing the epithelial phenotype compared to the cells of the non-adhesive culture.
Discussion In the course of our study, six morphological groups of cells obtained during the creation of a primary culture of a BC sample were identified, among which differences in the preservation of the epithelial nature throughout the cultivation were manifested.
Conclusion The choice of cultivation technique influences the ability of cells to retain the epithelial phenotype for three passages. In the second passage, the level of pancytokeratin expression in the adhesive culture is significantly differed from that in the non-adhesive culture. By the fourth passage there is a sharp decrease in the number of epithelial cells.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.